尼康 TS2 顯微鏡是一款常用于生物學(xué)研究的儀器，以下是使用它觀察動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞器的一般步驟：

尼康 TS2 顯微鏡樣品準(zhǔn)備

細(xì)胞培養(yǎng)：選擇合適的動(dòng)物細(xì)胞系，如 HepG2 細(xì)胞（人肝癌細(xì)胞系），在細(xì)胞培養(yǎng)瓶中使用含 10% 胎牛血清、1% 雙抗（青霉素 - 鏈霉素混合液）的 DMEM 培養(yǎng)基，置于 37℃、5% CO?的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

細(xì)胞固定：當(dāng)細(xì)胞生長至匯合度約 80% 時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用 PBS 緩沖液輕輕洗滌細(xì)胞 2 - 3 次。然后加入適量 4% 多聚甲醛溶液，室溫下固定 15 - 20 分鐘。

細(xì)胞通透：固定完成后，吸去多聚甲醛溶液，用 PBS 洗滌 3 次，每次 5 分鐘。接著加入 0.1% Triton X - 100 的 PBS 溶液，室溫孵育 10 - 15 分鐘，使細(xì)胞膜具有通透性。

封閉：用 PBS 洗去 Triton X - 100 溶液，然后加入含有 5% 牛血清白蛋白（BSA）的 PBS 溶液，室溫封閉 30 分鐘，以減少非特異性結(jié)合。

抗體孵育：

吸去封閉液，加入稀釋好的特異性一抗，如抗線粒體的兔多克隆抗體（1:100 稀釋），4℃孵育過夜。

次日，用 PBS 洗滌細(xì)胞 3 次，每次 10 分鐘，以去除未結(jié)合的一抗。

加入相應(yīng)的熒光標(biāo)記二抗，如山羊抗兔 IgG - FITC（異硫氰酸熒光素標(biāo)記，1:200 稀釋），室溫下避光孵育 1 - 2 小時(shí)。

孵育結(jié)束后，用 PBS 洗滌 3 次，每次 10 分鐘，洗去未結(jié)合的二抗。

細(xì)胞核染色：用含有 DAPI（4',6 - 二脒基 - 2 - 苯基吲哚）的染液對(duì)細(xì)胞進(jìn)行染色，終濃度為 1 μg/mL，室溫下避光染色 5 - 10 分鐘。染色完成后，用 PBS 洗去多余的 DAPI 染液。

封片：在載玻片上滴加適量的抗熒光淬滅封片劑，然后將細(xì)胞爬片小心地轉(zhuǎn)移到載玻片上，蓋上蓋玻片，盡量避免產(chǎn)生氣泡。

尼康 TS2 顯微鏡顯微鏡設(shè)置

光源調(diào)節(jié)：打開汞燈或 LED 光源，預(yù)熱 15 - 30 分鐘，使光源穩(wěn)定。根據(jù)熒光染料的激發(fā)波長，選擇合適的激發(fā)光濾光片組。例如，對(duì)于 FITC 標(biāo)記的細(xì)胞器，選擇藍(lán)光激發(fā)濾光片組；對(duì)于 DAPI 標(biāo)記的細(xì)胞核，選擇紫外光激發(fā)濾光片組。

物鏡選擇：根據(jù)觀察需求和細(xì)胞大小，選擇合適的物鏡。低倍物鏡（如 10×）可用于觀察細(xì)胞整體分布，高倍物鏡（如 40×、63× 或 100× 油鏡）用于觀察細(xì)胞器的細(xì)節(jié)。觀察細(xì)胞器一般使用 63× 或 100× 油鏡以獲得高分辨率圖像。

光路調(diào)整：

調(diào)節(jié)聚光鏡的高度和孔徑光闌，使光線均勻照亮樣品。對(duì)于高倍物鏡，適當(dāng)減小孔徑光闌可提高圖像對(duì)比度。

在熒光觀察時(shí)，通過調(diào)節(jié)熒光光路中的反射鏡和透鏡，確保激發(fā)光準(zhǔn)確照射樣品，且發(fā)射的熒光能有效被收集和成像。

尼康 TS2 顯微鏡觀察與分析

定位細(xì)胞：將制備好的樣品放在載物臺(tái)上，用低倍物鏡找到細(xì)胞群體，調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋和細(xì)準(zhǔn)焦螺旋使細(xì)胞圖像清晰。移動(dòng)載物臺(tái)，選擇細(xì)胞形態(tài)良好、分布均勻的區(qū)域進(jìn)行觀察。

切換高倍物鏡：在低倍物鏡下確定觀察區(qū)域后，小心切換到高倍物鏡，注意避免物鏡碰到樣品。切換后，微調(diào)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋使細(xì)胞器圖像達(dá)到最佳清晰度。

觀察細(xì)胞器：根據(jù)熒光標(biāo)記的顏色和位置觀察細(xì)胞器分布。如線粒體被 FITC 標(biāo)記為綠色，呈點(diǎn)狀或短棒狀分布于細(xì)胞質(zhì)中；細(xì)胞核被 DAPI 標(biāo)記為藍(lán)色，位于細(xì)胞中央?？捎^察細(xì)胞器的形態(tài)、數(shù)量、分布特點(diǎn)以及與其他細(xì)胞器或細(xì)胞結(jié)構(gòu)的相對(duì)位置關(guān)系。

圖像采集與分析：使用顯微鏡自帶的成像系統(tǒng)采集細(xì)胞和細(xì)胞器圖像。利用圖像分析軟件，如 NIS - Elements 軟件，測量細(xì)胞器的大小、數(shù)量、熒光強(qiáng)度等參數(shù)，還可通過對(duì)不同熒光通道圖像的疊加和分析，研究細(xì)胞器間的相互關(guān)系和空間分布規(guī)律。